Title

Efecto de la espermina en la expresión del gen de la amilasa e inmunoglobina M durante el desarrollo larvario de la cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatus

Author

Alicia Mónica Olalde Rodríguez

Contributor

RICARDO VAZQUEZ JUAREZ (Director)

Access level

Open Access

Summary or description

"El sistema de cultivo larvario de peces marinos ha sido hasta la fecha un cuello de botella en la acuacultura. Las bajas tasas de supervivencia en dichos sistemas se asocian a la incapacidad de las larvas para adaptarse a la secuencia de alimentación durante las primeras semanas de la crianza (Kolkovsky et el al., 1997). El cambio de alimentación endógena a exógena es concomitante a las transformaciones morfológicas y funcionales del tracto digestivo en larvas. Estudios previos indican que algunos componentes de las dietas inertes, así como alimento vivo, regulan la expresión de algunos genes de enzimas digestivas. Un bajo nivel de enzimas citosólicas, asociado a un aumento en las enzimas de la membrana del borde de cepillo, determinan enterocitos maduros en mamíferos y en peces. Aunado a la información sobre los patrones de expresión y actividad enzimática digestiva como indicadores de maduración digestiva (Tovar- Ramírez et al., 2002) éste es el primer informe que considera la Inmunoglobulina M como parámetro de maduración en larvas de peces marinos. Se obtuvieron huevos de un desove natural de reproductores de cabrilla arenera mantenidos bajo condiciones controladas en el laboratorio de Biología Experimental en CICIMAR-IPN (Rosales-Velásquez, 1997). Las larvas fueron sembradas en un sistema de recirculación cerrada y alimentadas con la microalga Nannochloropsis oculata (300,000 cells.ml-1) hasta 12dde. Las larvas fueron alimentadas con el rotífero Brachionus plicatillis (1-10 rotíferos. ml-1) de 2-15dde, con nauplios de Artemia sp. después de 15dde, y juveniles de artemia (2-6 nauplios ml-1) como tratamiento control. Tres tipos de microcápsulas fueron elaboradas como tratamientos experimentales para el 15dde, conteniendo 0%, 0.1%, y 0.3% de espermina. Las larvas fueron coalimentadas con alimento vivo y las microcápsulas por 5 días. Se obtuvo la cuantificación relativa de la expresión del gene de la amilasa y de la inmunoglobulina M en larvas de cabrilla arenera mediante extracción y la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-QPCR) usando Gene Expression assays de Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consistiendo en una mezcla de unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). Las sondas TaqMan® MGB (FAM™ dye-labeled) fueron diseñadas en base a las secuencias parciales de la amilasa y de la inmunoglobulina M de P. maculatofasciatus..."

"Large-scale egg production of marine fish has been a bottleneck in aquaculture systems. Low survival rates in rearing systems are associated with the incapacity of the larvae to adapt to the feeding sequence during the first weeks of culture (Kolkovsky et al., 1997). The change from endogenous to exogenous digestion is concomitant with the morphological and functional transformations of the digestive tract in larvae. Previous reports indicate that some components of the artificial diets, as well as live prey, regulate some digestive enzyme genes. Low levels of some cytosolic enzymes, associated with an increase in enzymes of the brush border membranes, dictates enterocyte maturation in mammals and fish. Contrary to the increasing information on digestive enzymes as maturation digestive indicators, this is the first report which considers the immunoglobulin M as a maturation parameter in marine fish larvae Eggs were obtained from natural spawns of spotted sand bass broodstock maintained under controlled conditions in the Laboratory of Experimental Biology at CICIMAR-IPN (Rosales-Velázquez, 1997). The larvae were reared in a closed recirculating system. Microalgae Nannochloropsis oculata (300 000 cells.ml-1) was added until 12 dah. Larvae were fed rotifers Brachionus plicatillis (1-10 rotifers. ml-1) from 2-15dah, with Artemia sp. nauplii after 15dah, and juveniles (2-6 nauplii ml-1) as a control treatment. Three types of microcapsules were supplied as experimental treatments on 15dah, with 0%, 0.1%, and 0.3% espermine. Larvae were fed live prey and microcapsules for 5 days. We obtained relative quantification of amylase and immunoglobulin M gene expression in larvae of spotted sand bass by RNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (RT-QPCR) using Gene Expression assays from the Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consisting of a mix of unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). The TaqMan® probes were designed based on the amylase and immunoglobulin M partial sequences of P. maculatofasciatus. The eukaryotic 18S rRNA (Applied Biosystems) was used as the endogenous control for normalizing mRNA levels of the target gene. For the enzyme amylase, the forward primer was 5´GTCTGGTCGGTCTGTTGGA-3´ and the reverse primer was 5´CTTGTTCATGAAGTCAGCAACCTT-3´. For immunoglobulin M, the forward primer was 5´TTCAAAACTGCAGACTGGAACAGT-3´and the reverse primer was 5´CACAGTTCCTTGATGGACTCATGAT-3´..."

Publisher

Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C.

Publish date

2005

Publication type

Master thesis

Publication version

Accepted Version

Format

application/pdf

Language

Spanish

Source repository

Repositorio Institucional CIBNOR

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