Título
Detección in vitro de oosporas de phytophthora infestans (mont.) de bary.
Autor
YISA MARIA OCHOA FUENTES
Colaborador
ALBERTO FLORES OLIVAS (Asesor de tesis)
VÍCTOR OLALDE PORTUGAL (Asesor de tesis)
ABIEL SANCHEZ ARIZPE (Asesor de tesis)
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Materias
Resumen o descripción
"El presente trabajo de investigación se realizó en el Centro de Investigación y de Estudios Avanzados (C1NVESTAV-IPN) Unidad Irapuato, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico Nacional Y la Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro en Saltillo, Coahuila; en el periodo de Febrero del año 2000 a Julio del año 2001. El trabajo tuvo como objetivo el desarrollar una metodología de detección in vitro de oosporas de P. infestans. En esta investigación se utilizaron aislados de los dos grupos de compatibilidad sexual de Phytophthora infestans (grupos Al y A2) los cuales fueron confrontados en medio de cultivo centeno agar, de esta manera se obtuvo concentraciones de oospora de 80,000 hasta 160,000 oosporas/ml, posteriormente estas oosporas fueron perfectamente purificadas con el complejo enzimático Novozym " 234; ya purificadas, se obtuvo la proteína de oosporas y micelios de diferentes especies de Phytophthora incluyendo a infestans y fueron cuantificadas las proteínas mediante el método de Bradford, 1976 y Kruger, 1994. Se realizó electroforesis en SDS- Poliacrilamida y se obtuvieron cuatro bandas proteicas exclusivas en el patrón de oosporas, tal es el caso de las bandas con un peso molecular de aproximadamente 17 kDa y 106 kDa en las oosporas y dos bandas de bajo peso molecular de aproximadamente 8.2 y 8.7 kDa. También se observó en el patrón electroforético que existen bandas proteicas conservadas en el micelio de todas las especies de Phytophthora incluyendo infestans; así como a las oosporas de P. infestans la banda presentó un peso de 19.9 kDa. Otra observación derivada del perfil electroforético es la presencia de una banda de 14 kDa en el patrón de P. cinnamomi, que es muy semejante a la que se observa en P. citrophthora, esta misma banda se presentó también en P. citricola. Para la inmunodetección se eligieron dos anticuerpos desarrollados previamente los cuales fueron específicos a oosporas de P. infestans; ya que se requería que la inmunodetección fuera lo más específica y evidente posible. La autorradiografía de los anticuerpos reveló una fuerte inmunodetección de dos bandas proteicas de bajo peso molecular de aproximadamente 33.2 y 26.9 kDa, respectivamente; dichas bandas no sólo fueron detectadas en oosporas, sino también en micelio de P. cinnamomi, P. parasitica, P. citrophthora y P. capsici, pero no se presentaron en P. infestans. También se pudo observar que en la muestra de oosporas se detectaron por este mismo suero, otras dos bandas proteicas de un alto peso molecular correspondientes a 106 y 123.6 kDa aproximadamente, mismas que no se presentan en el resto de las muestras; es decir, fueron específicas para oosporas."
"This investigation was realized in the CINVESTAV-IPN Unit Irapuato, National School of Biological Sciences of IPN and the UAAAN Saltillo Mexico; during the period of February, of 2000 to July, of 2002. The objective was to develop a methodology of detection in vitro P. infestans of oospores. We used isolated (Al and A2) of Phytophthora infestans of both compatibility, which were confronted in rye agar culture, of this way, we were obtained 80,000 up to 160,000 oospores/ml concentrations of oospores , later these oospores were perfectly purified with the Novozym tm 234 enzymatic complex; proteins purified, were obtained of oospores and micelia of different species of Phytophthora including to infestans and the proteins were quantified by means of the Bradford method. (1976 and Kruger, 1994). SDS- Poliacrilamid electrophoresis was realized and four bands proteins exclusive were obtained in the oospores pattern, such bands with 17 kDa and 106 kDa molecular weight of approximately in the oospores and two bands of low molecular weight of approximately 8.2 y 8.7 kDa. Showed that bands conserved proteins as the one that was observed in electrophoretic patron of the P. infestans micelia whit a molecular weight of 19.9 kDa , the which is common in all the species and the oospores. Another observation, electrophoretic profile presented a 14 kDa band by P. cinnamomi that was similar to one observes in P. citrophthora, this same band was also presented in P. citricola. Two antibodies were chosen for the inmunodetection, which one were developed previously contra P. infestans oospores; since it was required that the inmunodetection was the most specific and evident possibly. Autoradiographyc of revealed strong inmunodetection from two bands of low molecular weight of approximately 33.2 and 26.9 k Da, respectively; non alone these bands were detected in oospores, also of P. cinnamomi, P. parasitica, P. citrophthora and P. capsici micelia, but they were not presented in P. infestans. Sample of oospores were detected by this same antibody , other two bands proteics of a high molecular weight correspondents to 106 and 123.6 kDa, respectively , same that they do not appear in the rest of the samples; that it to say, they were specific for oospores."
Fecha de publicación
15 de octubre de 2002
Tipo de publicación
Tesis de maestría
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Versión publicada
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Formato
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Idioma
Español
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Estudiantes
Investigadores
Repositorio Orígen
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