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Hybridization vs. bond stretching isomerism in Ru(II) cyclometalated complexes of 2-phenylpyridine

Bertha Molina LARISSA ALEXANDROVA Ronan Le Lagadec LUIS ENRIQUE SANSORES CUEVAS DAVID RIOS JARA FRANCISCO ESPINOSA MAGAÑA (2012)

"The phenomenon of formation of two isomers, yellow and orange, of the cyclometalated Ru(II) complex, [Ru(o-C6H4-py)(MeCN)4]+, was investigated by EELS spectroscopy and theoretical calculations. Both forms show very similar structures and spectroscopic properties, but slight differences in X-ray data and absorption between them were noted. No double minimum on the potential energy surface was found and thus these two forms cannot be considered as bond stretching isomers. However, the DFT study revealed the change in the hybridization of the carbon in trans-position of one of acetonitrile ligands. This effect can be responsible for the difference in colour. The results of the theoretical modelling coincide well with the experimental EELS data."

Article

Hybridization isomerism; Bond stretch isomerism Ru organometallic complexes Trans effect EELS spectroscopy Time dependent DFT calculations BIOLOGÍA Y QUÍMICA QUÍMICA QUÍMICA ORGÁNICA

Estandarización de protocolos para la obtención de híbridos de abulón rojo (Haliotis rufescens) con abulón amarillo (Haliotis corrugata) y abulón azul (Haliotis fulgens  guadalupensis)

Standardization of protocols to obtain hybrids of red abalone (Haliotis rufescens) with pink abalone (Haliotis corrugata) and green abalone (Haliotis fulgens guadalupensis)

ERIK FERNANDO GONZALEZ ARAGON (2017)

En este trabajo se abordaron diversos aspectos de biología reproductiva en haliótidos que permiten generar híbridos de abulón rojo con abulón amarillo y azul, las tres especies de mayor producción acuícola y pesquera en México. El propósito del trabajo fue generar información para establecer estrategias de manejo de reproductores silvestres y facilitar la obtención de progenies híbridas interespecíficas. En el caso de abulón rojo, dado que la especie ha sido cultivada por más de 30 años, los protocolos de maduración gonadal y obtención de gametos viables esta bien documentada. Sin embargo, en abulón amarillo y azul el manejo en cautiverio no ha sido documentado. Para cuantificar la Temperatura Efectiva Acumulada (TEA; °C·día) necesaria para alcanzar la maduración sexual, se acondicionaron diez abulones amarillos silvestres gradualmente de 16 hasta 18 °C, y posteriormente fueron mantenidos a 18 °C por un periodo de 5 meses en un sistema de recirculación. Con base en el Índice Visual Gonadal (IVG) y el análisis histológico del tejido gonadal, se lograron registrar diferentes estadíos de madurez gonadal y se determinó que la TEA de 2400 °C·día permite obtener organismos maduros. Una vez obtenidos organismos grávidos, diferentes métodos de inducción al desove fueron probados (TRIS-H2O2 y UV) sin obtener una respuesta al estímulo de los abulones amarillo y azul silvestres. Por lo cual, utilizando como modelo al abulón rojo, se evaluó la viabilidad de los gametos cuando estos son obtenidos a través del método de biopsia del tejido gonadal tomando como referencia el éxito en la fecundación, eclosión y supervivencia larval. El esperma se evaluó incrementando la concentración y aumentando el tiempo de contacto entre esperma y ovocitos, los resultados mostraron una alta capacidad para fecundar ovocitos alcanzando valores de 33 hasta 85 %, sin afectar la eclosión ni la supervivencia las cuales registraron valores de 63-96 % y del 12-38 %, respectivamente. Por otro lado, la viabilidad de los ovocitos se evaluó a través de dos hembras sometidas a biopsia con y sin previa exposición a una solución inductora al desove de TRIS-H2O2. Los resultados mostraron que los ovocitos de la hembra previamente expuesta a la solución inductora son altamente viables registrando un 96 % de fecundación y un porcentaje de eclosión mayor al 82%. Mientras que, en el caso de la hembra que no fue expuesta a una solución inductora el porcentaje de fecundación fue de hasta 25 % y no se presentó

In this work, we address several aspects of reproductive biology in haliotids that allow the production of hybrids from red, pink and green abalones, the three main species cultured and fished in Mexico. The purpose of this work was to generate information to establish wild breeding stock management strategies and to facilitate the interspecific hybrid offpring attainment. In the case of red abalone, since the species has been cultivated for more than 30 years, gonad maturation protocols and obtaining viable gametes are well documented. However, in pink and green abalone the management in captivity has not been documented. In order to asess the account the the Effective Accumulated Temperature (EAT; °C·day) needed to reach sexual maturation, were conditioned ten wild pink abalone gradually from 16 to 18°C of temperature and subsequently were maintained at 18 °C for five months in a recirculation aquaculture system. Based on the Visual Gonad Index (IVG) and the histological analysis of the gonad tissue, it was possible to record different stages of gonadal maturity and it was determined that the TEA of 2400 ° C·day allows to obtain mature organisms. Once gravid organisms were obtained, different methods of spawning induction were tested (TRIS-H2O2 and UV) without obtaining a response to the stimulus of wild pink and green abalone. Therefore, using the red abalone as a model, the viability of the gametes was assessed when they were obtained through gonadal tissue biopsy method, taking as reference the succses in the rate of fertilization, hatching and larval survival. The sperm was evaluated by increasing the concentration and increasing the contact time between sperm and oocytes, the results showed a high capacity to fertilize oocytes reaching values of 33 to 85 %, without affecting hatching or survival, which registered values of 63-96 % and 12-38 %, respectively. On the other hand, the viability of the oocytes was evaluated through two females submitted to biopsy with and without previous exposure to a solution inducing the spawning of TRIS-H2O2. The results showed that the oocytes of the female previously exposed to the induction solution are highly viable with a 96 % fertilization rate and a hatching percentage greater than 82 %. Whereas, in the case of the female that was not exposed to an induction solution, the percentage of fertilization was less than 25 % and no hatching occurred. Therefore, it was demonstrated that the gonadal biopsy of both male

Master thesis

Maduración gonadal Desarrollo larval Hibridación Gonadal development Larval development Hybridization BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA ANIMAL (ZOOLOGÍA) EMBRIOLOGÍA ANIMAL

Impact of improved maize germplasm on poverty alleviation : the case of Tuxpeño-Derived materials in Mexico

Mauricio Bellon (2005)

This study documents the use of improved maize germplasm by poor small-scale farmers in lowland tropical Mexico and how it contributes to their well-being. To this end, the direct adoption of improved varieties and their “creolization” process were assessed. Farmers produce what they recognize as “creolized” varieties by exposing improved varieties to their conditions and management, continually selecting seed of these varieties for replanting and, in some cases, promoting their hybridization with landraces, either by design or by accident. Our key hypothesis is that improved germplasm benefits poor farmers through creolization, which

provides them with new options. In creolization, farmers take an improved technology generated by the formal research system and deliberately modify it to suit their needs. Different

methodologies such as participatory methods, ethnographic case studies, household surveys,

collection of maize samples, and agronomic evaluation of those samples were applied in this

study, which was conducted in two areas: the coast of Oaxaca and La Frailesca, in the states of

Oaxaca and Chiapas, two of the poorest in Mexico. The study areas are contrasting—one

subsistence-oriented and the other commercial—but extreme poverty is pervasive in both.

Maize continues to play a key role in the livelihoods of the poor in both areas. Results show

that different maize germplasm types, such as improved varieties and, particularly, creolized varieties, are planted in both areas. The impacts of different types of improved maize germplasm are defined and analyzed based on how well they supply farmers with traits they consider important, and the trade-offs they entail. Results also show that creolized varieties occupy a niche that shifts according to the availability of improved germplasm and the orientation of farmers’ maize production.

Book

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Management Hybridization Germplasm Varieties Agricultural situation Maize Seed production Farmers Poverty

Medicinal plant knowledge in Caribbean Basin: A comparative study of Afrocaribbean, Amerindian and Mestizo communities

MARTHA ELENA MENDEZ GONZALEZ (2015)

The Caribbean Basin has complex biogeographical and cultural histories that have shaped its highly diverse botanical and cultural landscapes. As a result, the current ethnic composition of the Basin is a heterogeneous mixture including Amerindian, Afrocaribbean and a wide range of Mestizo populations. A comparison was done of the medicinal plant repertoires used by these groups to identify the proportion of native species they include and any differences between the groups. Methods: The TRAMIL program has involved application of ethnopharmacological surveys to gather data on the medicinal plants used for primary care in 55 locations the Caribbean Basin.

Article

MEDICINAL FLORA CARIBBEAN BASIN CULTURAL INTERMIXING MIGRATION HYBRIDIZATION BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Impact of improved maize germplasm on poverty alleviation : the case of Tuxpeño-Derived materials in Mexico

Mauricio Bellon (2005)

This study documents the use of improved maize germplasm by poor small-scale farmers in lowland tropical Mexico and how it contributes to their well-being. To this end, the direct adoption of improved varieties and their “creolization” process were assessed. Farmers produce what they recognize as “creolized” varieties by exposing improved varieties to their conditions and management, continually selecting seed of these varieties for replanting and, in some cases, promoting their hybridization with landraces, either by design or by accident. Our key hypothesis is that improved germplasm benefits poor farmers through creolization, which

provides them with new options. In creolization, farmers take an improved technology generated by the formal research system and deliberately modify it to suit their needs. Different

methodologies such as participatory methods, ethnographic case studies, household surveys,

collection of maize samples, and agronomic evaluation of those samples were applied in this

study, which was conducted in two areas: the coast of Oaxaca and La Frailesca, in the states of

Oaxaca and Chiapas, two of the poorest in Mexico. The study areas are contrasting—one

subsistence-oriented and the other commercial—but extreme poverty is pervasive in both.

Maize continues to play a key role in the livelihoods of the poor in both areas. Results show

that different maize germplasm types, such as improved varieties and, particularly, creolized varieties, are planted in both areas. The impacts of different types of improved maize germplasm are defined and analyzed based on how well they supply farmers with traits they consider important, and the trade-offs they entail. Results also show that creolized varieties occupy a niche that shifts according to the availability of improved germplasm and the orientation of farmers’ maize production.

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CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Management Hybridization Germplasm Varieties Agricultural situation Maize Seed production Farmers Poverty

Determinación del cariotipo y mapeo físico de los genes 5s y 45s rDNA en Tigridia pavonia variedad Dulce

HUGO ABELARDO ARROYO MARTINEZ (2016)

Tigridia pavonia (Lf) DC es una especie cuyas características morfológicas le confieren un gran potencial ornamental. Debido a la heterogeneidad morfológica de los individuos de esta especie, en el 2001 se describieron nueve variedades botánicas. Entre ellas Dulce presenta la menor formación de semillas lo cual podría significar la presencia de cambios cromosómicos. El establecimiento de las características citogenéticas de una especie es de gran interés para estudios taxonómicos y en programas de mejoramiento genético ya que facilita la selección de especies parentales más cercanas. Aunado a esto con el desarrollo de la técnica de FISH, se ha podido identificar genes de interés y establecer una mejor diferenciación de los cromosomas homólogos. A pesar de ello, no hay reportes sobre las características citogenéticas de todas las variedades. Por lo anterior en el presente estudio se determinó su cariotipo, y se realizó el mapeo físico de los genes 5s y 45s rDNA por medio de FISH. Los resultados mostraron que Tigridia pavonia variedad Dulce conserva su cariotipo bimodal exhibiendo un número cromosómico de 2n = 2x = 28+3B, observando por primera vez la presencia de cromosomas B en la especie, lo que dista de reportes anteriores. De igual forma se logró la amplificación de los genes 5s y 45s rDNA por medio de la técnica de FISH, donde el gen 5s rDNA amplificó en ocho regiones diferentes, mientras que el gen 45s rDNA se observó en 10 de ellas, de las cuales, cuatro correspondían a constricciones secundarias. Esta información puede servir de base para futuros análisis evolutivos, y/o de mejoramiento genético en la especie.

El género Tigridia incluye al menos 43 especies y seis subespecies, de las cuales, 41 son endémicas de México (Munguía-Lino et al. 2015). Entre ellas, Tigridia pavonia (Lf) DC se destaca por la gran variabilidad en el color y belleza de su flor como atractivo recurso florícola. Hoy en día es ampliamente cultivada en Europa, Asia y Australia, donde se comercializa como planta para jardinería. Para esta especie se conocen nueve variedades registradas en el Catálogo Nacional de Variedades Vegetales (SNICS 2008). Entre ellas T. pavonia variedad Dulce es de gran interés debido a que es la variedad que muestra un menor porcentaje de fertilidad lo cual podría denotar cambios cromosómicos en la especie. Si bien es sabido que las características cromosómicas se mantienen de una generación a otra, aun entre variedades, a menudo ocurren variaciones estructurales y/o numéricas que pueden cambiar el número, tamaño y posición centromérica de los cromosomas, lo cual puede generar variabilidad genética (Levitus et al., 2010). Es por ello que el análisis de estas características puede servir para establecer relaciones filogenéticas más certeras, así mismo, en programas de mejoramiento genético el conocimiento de las características citogenéticas suele jugar un papel importante a la hora del establecimiento de las cruzas ya que como menciona Lakshmanan et al. (2015), el éxito del cruzamiento interespecifico o intergenerico usando métodos de mejoramiento tradicionales, depende principalmente de que tan citogenéticamente cercanos sean los progenitores. Por otro lado con el desarrollo de la técnica de Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) se ha facilitado la obtención de patrones de sondas específicos para la discriminación de cromosomas similares, así como el mapeo físico y la identificación de genes de interés 1 (Navrátilová et al. ,2003), por lo que la adición de esta información a las características normales del cariotipo permite realizar estudios más detallados y precisos. A pesar de ello se conoce muy poco sobre las características citogenéticas de cada una de las variedades, existiendo únicamente reportes referentes a su número cromosómico y bimodalidad del complejo cromosómico, además de que ciertos aspectos como la posición de las constricciones secundarias varían de un autor a otro. Por lo anterior la determinación del cariotipo y el mapeo físico de los genes 5s y 45s rDNA en Tigridia pavonia variedad Dulce, podrá servir para tener un mayor conocimiento de los cambios cromosómicos en la especie, así como su uso en programas de mejoramiento genético.

CONACyT

Master thesis

cariotipo mapeo físico genes 5s y 45s rdna tigridia pavonia genes ribosomales fluorescence in situ hybridization cromosomas b CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Una estrategia para detectar anomalías cromosómicas en niños con leucemia linfoblástica aguda. /

A Strategy to detect chromosomal abnormalities in children with acute lymphoblastic leukemia.

SILVIA PATRICIA PEREZ VERA SARA FRIAS VAZQUEZ JOSE MIGUEL BETANCOURT RULE MARISA MUJICA SANCHEZ ROBERTO RIVERA LUNA ROCIO ORTIZ LOPEZ (2004)

Conventional cytogenetics (CC) can be used to identify chromosomal abnormalities that are predictors of treatment outcome in acute lymphoblastic leukemia (ALL). The detection of abnormalities in ALL is difficult because low mitotic index and poor-quality metaphases are obtained. Flow cytometry (FC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) can be used to detect aneuploidy in any phaseofthecellcycle,increasingthenumberofanalyzablecells.The aim of this study was to develop a strategy combining these methods toimprovethefrequencyofchromosomeabnormalitydetection.One hundred children with newly diagnosed ALL were included. CC and DNA content analysis by FC were performed in all patients. The numericalabnormalitiesidentifiedbybothmethodswerecomparedand patientswereclassifiedasconcordantordiscordant.FISHwasusedto support aneuploidy results in discrepant cases using centromeric probesforthechromosomesmostfrequentlyinvolvedinaneuploidy. CC and FC showed high concordance (86%). Fourteen cases were discrepant: nine showed hypodiploidy and low hyperdiploidy by cytogenetics and five showed high hyperdiploidy by FC. FISH confirmed aneuploidy in 12 cases in which it could be performed. High hyperdiploidywasthemostcommonabnormality;the31casesshowing this aneuploidy were identified by FC. The search for abnormalities must begin by measuring DNA content to detect this aneuploidy, whichisusefultoevaluatethepatient’srisk.However,itisimportant toscreenforstructuralabnormalitiesbyCCormoleculartechniques. This strategy may detect chromosomal abnormalities, optimizing resourcesinlaboratorieswherenotallthescreeningmethodsareavailable.

Article

MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD Aberraciones cromosómicas Técnicas de diagnóstico molecular - Métodos Leucemia - Linfoma linfoblástico de células precursoras - Genética Chromosome aberrations Molecular diagnostic techniques - Methods Precursor cell lymphoblastic leukemia-Lymphoma - Genetics Anomalías cromosómicas Leucemia linfoblástica aguda Contenido de ADN Citometría de flujo La fluorescencia de hibridación in situ Chromosomal abnormalities Acute lymphoblastic leukemia DNA content Flow cytometry Fluorescence in situ hybridization

Susceptibilidad de Litopenaeus schmitti y Cherax quadricarinatus al virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV)

Susceptibility of Litopenaeus schmitti and Cherax quadricarinatus to white spot syndrome virus (WSSV)

MARCO LINNE UNZUETA BUSTAMANTE GABRIEL AGUIRRE GUZMAN RICARDO VAZQUEZ JUAREZ (2004)

"Se realizaron bioensayos en un sistema cerrado con condiciones controladas para determinar la susceptibilidad de Litopenaeus schmitti y Cherax quadricarinatus al virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV) usando L. vannamei como especie de referencia positiva para esta infección viral. Los organismos fueron inyectados intramuscularmente (20 µL camarón–1) con una preparación de WSSV obtenida del Laboratorio de Patología Acuícola de la Universidad de Arizona, siendo posteriormente distribuidos al azar en sus respectivos tanques. La susceptibilidad hacia WSSV fue significativamente mayor en L. vannamei que en las otras especies (P < 0.05). El análisis histológico demostró la presencia de cuerpos característicos de las infecciones con WSSV en las tres especies de crustáceos, con una distribución variable dependiendo del tejido y especie. La hibridación in situ permitió también determinar la presencia de estos signos en hemocitos y el hepatopáncreas."

"Bioassays were carried out in a closed system to evaluate the susceptibility of Litopenaeus schmitti and Cherax quadricarinatus to white spot syndrome virus (WSSV) using L. vannamei as the positive control reference species. Animals were injected intramuscularly (20 µL shrimp–1) with a WSSV preparation obtained from the Aquaculture Pathology Laboratory of the University of Arizona. These infected organisms were reared separately in their respective experim Pathology Laboratory of the University of Arizona. These infected organisms were reared separately in their respective experimental tank. Susceptibility to WSSV was significantly greater in L. vannamei than in the other two species (P < 0.05). The histological analysis showed characteristic inclusion bodies of WSSV in these three crustacean species, with a different distribution of infection depending on the tissue and species. In situ hybridization also showed these signs of infection in hemocytes and hepatopancreas."

Article

WSSV, Litopenaeus vannamei, Cherax quadricarinatus, susceptibilidad, hibridación in situ Susceptibility, in situ hybridization BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA VIROLOGÍA VIROLOGÍA ANIMAL

Reutilización del sistema microalga-bacteria empleado para el tratamiento terciario de aguas residuales domésticas: su aplicación como inoculante en suelo de zonas áridas

ADAN TREJO RANGEL (2010)

"Una de las biotecnologías que ha sido investigada a nivel de laboratorio en los últimos años ha sido la inmovilización de microalgas y bacterias en esferas alginato para el tratamiento terciario de aguas residuales domésticas. Ya que la biomasa resultante queda disponible al finalizar dicho proceso, se propone reutilizarla y así dar una continuidad a su aplicación biotecnológica. De esta manera, este proyecto tuvo como objetivo evaluar la reutilización del sistema microalga-bacteria como inoculante así como su efecto al ser aplicado en suelo. Las estrategias desarrolladas para tal fin fueron: 1) determinación de la viabilidad de Azospirillum brasilense Cd después de utilizarse en el sistema microalga-bacteria para la eliminación de nitrógeno de agua; 2) evaluación de la utilidad del sistema microalga-bacteria como inoculante a partir de la detección de Azospirillum brasilense en raíz y su efecto positivo en el crecimiento de la planta; y 3) determinación del efecto del sistema microalga-bacteria en suelo de zonas áridas. Para probar el sistema microalga-bacteria como inoculante, las esferas se deshidrataron a 28-30°C durante 48 hrs. Después de la deshidratación de las esferas, se llevó a cabo el conteo directo de células de A. brasilense mediante tinción de Fluoroscein diacetato (FDA) y el apoyo de un microscópio óptico de epifluorescencia. Para evaluar la utilidad del sistema microalga-bacteria como inoculante, se inocularon semillas de sorgo y se sembraron en suelo procedente de la zona del Comitán, a 17 km al noreste de la Paz, Baja California Sur, México, el cual se utilizó por tener muy bajo contenido y aportación de materia orgánica (0.4334%). Las semillas inoculadas se mantuvieron en invernadero y crecieron durante 20 días, para después realizar la medición de longitud de raíz y parte aérea, además de su peso seco. La detección de A. brasilense en raíz se realizó utilizando la técnica de hibridación fluorescente in situ, microscopía óptica epifluorescente y microscopía láser confocal, incluyendo además el uso de microscopía electrónica de barrido..."

"Immobilization of the microalgae Chlorella vulgaris with the bacteria Azospirillum brasilense in alginate beads for tertiary municipal wastewater treatment is one of the latest biotechnologies investigated at the laboratory level. Since the final product of this biotechnological process is greater microalgal and bacterial biomass, it can be re-used in further applications. This study assessed re-use of the microalgabacteria system as an inoculant and its effect when used as an amendment for infertile desert soils. The strategies developed for this purpose were: (1) Determine the viability of Azospirillum brasilense Cd after the microalgae-bacteria system was used for removing nitrogen products from water; (2) Assess the effect of the microalgae-bacteria system as an inoculant on plants to increase growth and measure Azospirillum brasilense on plant roots after inoculation; and (3) Determine the effect of the microalgae-bacteria system on organic matter and carbon content in desert soils. To evaluate the microalgae-bacteria system as an inoculant, the beads were dehydrated at 2830 °C for 48 h. After dehydration, cell counts of A. brasilense were made by fluoroscein diacetate staining and an epifluorescence microscope. Sorghum seeds were inoculated with dehydrated beads and planted in soil with low organic matter (0.4334%). Inoculated seeds were grown for 20 days in a greenhouse. Root and shoot length and dry weight were measured. Detection of A. brasilense on plant root was performed by fluorescence in situ hybridization technique and epifluorescence and confocal laser microscopy, as well as scanning electron microscopy..."

Master thesis

Sistema microalga-bacteria, Inoculante microbiano, Hibridación fluorescente in situ microalgae-bacteria system, microbial inoculant, Fluorescent in situ hybridization BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA VEGETAL (BOTÁNICA) ALGOLOGÍA (FICOLOGÍA)

Expresión génica diferencial en células blancas de cabrilla sardinera Mycteroperca rosacea ante la infección experimental con Aeromonas hydrophila

TANIA LIBERTAD LOPEZ MEDINA (2010)

La acuicultura se ve fuertemente afectada por patologías bacterianas que provocan mortalidades en la producción e importantes pérdidas económicas; por ello, uno de los principales retos del sector, es su prevención y eliminación. El estudio del sistema inmune como mecanismo de defensa ante enfermedades nos permite conocer la respuesta de los peces cuando se ven expuestos a una diversidad de agentes patógenos. Una de las estrategias para el estudio del sistema inmune, es la evaluación de la expresión génica bajo cierto estímulo, por ejemplo, la infección experimental. A pesar de que la cabrilla sardinera Mycteroperca rosacea es considerada un candidato potencial de cultivo, no se tienen antecedentes de su capacidad de respuesta ante agentes patógenos comunes en granjas de producción. El propósito de éste trabajo fue investigar la respuesta, con énfasis en la respuesta inmune a nivel transcripcional, de la cabrilla sardinera experimentalmente infectada con la bacteria Aeromonas hydrophila, un importante patógeno secundario capaz de ocasionar severas enfermedades en peces marinos y de agua dulce. Con el fin de obtener una perspectiva más amplia de la respuesta, en el presente trabajo se utilizó la técnica de hibridación sustractiva por supresión para generar una colección de genes expresados por efecto de la infección experimental. Se seleccionaron y secuenciaron aleatoriamente un total de 329 clonas y después de su análisis bioinformático, se obtuvieron un total de 108 secuencias que mostraron identidad con otras especies de teleósteos. La cuantificación del nivel de expresión de cinco transcritos mostró que los cinco se ven expresados por efecto de la infección experimental y dado que tres de las secuencias analizadas están involucradas directamente en rutas de señalización, se sugiere que los mecanismos de transducción de señales tienen un rol importante en la respuesta transcripcional tardía de M. rosacea ante la infección con A. hydrophila.

The most significant factor affecting aquaculture is the incidence of microbial pathologies, mainly bacterial in origin. Nowadays, the main challenges of fish farming industry are prevention and eradication of these diseases that provoke severe mortalities which in turn, cause economic losses. The assessment of immune system as an integrative defense upon bacterial infection enables us to elucidate the mechanisms that regulate this protection and one of the commonly used strategies for its assessment is the evaluation of immune gene expression upon certain stimulus (e.g. experimental bacterial infection). In BCS, leopard grouper Mycteroperca rosacea is considered a potential candidate species for aquafarming, however there are no previous reports of its response capacity when facing farm-common bacterial pathogens. The aim of this work was to investigate the response at a transcriptional level, emphasizing the immune response of leopard grouper experimentally challenged with Aeromonas hydrophila, an important opportunistic bacterial pathogen for several marine and fresh water farmed fish species. In order to obtain a wider perspective of the response displayed, it was employed the suppressive subtractive approach to generate a cDNA library of overexpressed genes after a bacterial experimental infection. Random clones (329) were selected and sequenced. After assembling, 108 singlets were finally obtained, some of which were immune-related genes. A real time reverse transcription-PCR analysis of the expression patterns of five transcripts showed that all of them were upregulated after 72 h of double bacterial challenge stimulation. Since three of the analyzed sequences are involved in signaling pathways, it is proposed that these mechanisms are specially activated in late gene response of leopard groupers experimentally infected with A. hydrophila.

Master thesis

Mycteroperca rosacea, Aeromonas hydrophila, leucocitos, sistema inmune, hibridación sustractiva por supresión Mycteroperca rosacea, Aeromonas hydrophila, leukocytes, immune system, suppressive subtractive hybridization BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA INMUNOLOGÍA INMUNOPATOLOGÍA