Author: Joaquín Murguía González

Regeneración in vitro de Laelia anceps ssp. Dawsonii

In vitro regeneration of Laelia anceps ssp. dawsonii

Hilda Eulalia Lee Espinosa ANTONIO LAGUNA CERDA Joaquín Murguía González PABLO ELORZA MARTINEZ Lourdes Georgina Iglesias Andreu BENJAMIN GARCIA ROSAS FELIPE ALONSO BARREDO POOL NANCY SANTANA BUZZY (2007)

Se germinaron in vitro semillas de Laelia anceps ssp. dawsonii, una orquídea silvestre amenazada, originaria de México y Mesoamérica, con alto potencial ornamental, utilizando el medio Murashige & Skoog (1962) suplementado con ácido 1-naftalén-acético (ANA), 6-benzyl-amino-purina (BAP), Kinetina (Kin) y ácido indol-3-acético (AIA), 2 mg L-1 de cada uno, el cual resultó óptimo para la inducción de callo bajo fotoperiodo de 16/8 h (20.2 µmol·m-2·s-1). El callo fue subcultivado a intervalos de 45 días en el mismo medio de cultivo, produciendo en promedio 524 embriones somáticos en el tercer subcultivo. Los embriones somáticos producidos se convirtieron en plantas completas con brotes y raíces en el mismo medio, y fueron transferidas al medio VW suplementado con BAP 2 mg L-1, AIA 1 mg L-1 y carbón activado 0.2 % para su desarrollo. Después de aproximadamente tres meses, las plántulas fueron aclimatizadas en el invernadero con un 100 % de tasa de sobrevivencia.

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ORCHIDACEAE MORFOGENESIS CALLOS EMBRIOGENICOS EMBRIONES SOMATICOS EMBRIOGENESIS SOMATICA BIOLOGÍA Y QUÍMICA BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Un protocolo de embriogénesis somática para la regeneración y caracterización in vitro de Laelia Anceps Ssp. Dawsonii

Hilda Eulalia Lee Espinosa ANTONIO LAGUNA CERDA Joaquín Murguía González Lourdes Georgina Iglesias Andreu BENJAMIN GARCIA ROSAS DIANA ESCOBEDO LOPEZ YOLANDA MARIA MARTINEZ OCAMPO FELIPE ALONSO BARREDO POOL (2010)

Laelia anceps subespecie dawsonii, es una de las orquídeas silvestres mexicanas más apreciadas, con potencial ornamental por sus atractivas características que le permiten cumplir estándares internacionales de calidad y la convierten en una especie económicamente importante. Ello ha provocado su colecta excesiva y el consecuente riesgo de extinción. Para asegurar su conservación, es necesario desarrollar protocolos eficientes de propagación para esta especie, que permitan su uso sustentable y reduzcan la colecta. La embriogénesis somática constituye una tecnología eficiente para la multiplicación in vitro de especies vegetales. En este estudio, se evaluaron las condiciones in vitro para desarrollar un protocolo de embriogénesis somática para Laelia anceps ssp. dawsonii. A partir de semillas se indujo callo embriogénico en el medio Murashige y Skoog suplementado con ácido naftalénacético (ANA), 6-bencilami-nopurina (BAP), cinetina (Kin) y ácido indol acético (AIA), en combinaciones múltiples. La combinación ANA+BAP+AIA (2 mg L-1 de cada una) resultó óptima para inducción de callo pues produjo 611 embriones somáticos en fotoperiodo de 16 h (33.8 ¿mol m-2 s-1), con tres subcultivos a intervalos de 45 d en el mismo medio de cultivo, en el que además los embriones desarrollaron plántulas completas. En aproximadamente tres meses, las plántulas alcanzaron 4 a 5 cm en el medio Vacin y Went suplementado con BAP (2 mg L-1), AIA (1 mg L-1) y carbón activado (0.2 %), y después de 30 d, se aclimataron en invernadero, con 95 % de sobrevivencia.

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Biología Laelia anceps ssp dawsonii Cultivo in vitro Embriogénesis somática Orchidaceae CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Encapsulación de embriones somáticos de Laelia Anceps Ssp. Sawsonii para la producción de semilla sintética

Hilda Eulalia Lee Espinosa Joaquín Murguía González ANTONIO LAGUNA CERDA BENJAMIN GARCIA ROSAS Martín Roberto Gámez Pastrana María Elena Galindo Tovar IVONNE LANDERO TORRES Lourdes Georgina Iglesias Andreu NANCY SANTANA BUZZY (2009)

Los embriones somáticos de Laelia anceps ssp. dawsonii, obtenidos a partir de semillas germinadas en un medio MS suplementado con ácido naftalen-acético (ANA), 6, bencilaminopurina (BAP) y ácido indol-3-acético (AIA), 2 mg·litro-1 de cada uno fueron encapsulados en matriz de alginato de sodio en complejo con cloruro de calcio (CaCl2·2H2O) 75 mM, para producir semillas sintéticas, como una estrategia de rescate y conservación. Para determinar el efecto de factores físicos y químicos tales como temperatura y tiempo de almacenamiento, consistencia de la matriz de alginato, concentración de nutrimentos minerales y reguladores del crecimiento vegetal, sobre el porcentaje y tiempo de germinación, así como viabilidad de las semillas sintéticas, se probaron concentraciones de alginato de sodio al 2.0, 3.0 y 4.0 %, de sales de MS (37.5, 50 y 100 %) y BAP (0.5, 1.0 y 2.0 mg·litro-1) adicionados a la matriz de encapsulación, además de diferentes temperaturas (4, 20 y 25 °C) y tiempos de almacenamiento (15 y 30 días). Se observó el 100 % de germinación cuando las semillas fueron encapsuladas con 3 % de alginato de sodio en complejo con CaCl2·2H2O a 75 mM; con las sales MS al 100 y 50 % en la matriz de encapsulación, suplementando 2.0 mg·litro-1 de BAP, se logró un porcentaje de germinación del 64.54 y 62.77 %, respectivamente, sin existir diferencia significativa entre ellas.

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Agrociencias Orchidaceae Semilla artificial Embriogénesis somática CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Un protocolo de embriogénesis somática para la regeneración y caracterización in vitro de Laelia anceps ssp. dawsonii

A protocol of somatic embryogenesis for the in vitroregeneration and characterization of Laelia anceps ssp. dawsonii

Hilda Eulalia Lee Espinosa ANTONIO LAGUNA CERDA Joaquín Murguía González Lourdes Georgina Iglesias Andreu BENJAMIN GARCIA ROSAS DIANA ESCOBEDO LOPEZ YOLANDA MARIA MARTINEZ OCAMPO FELIPE ALONSO BARREDO POOL NANCY SANTANA BUZZY (2010)

Laelia anceps ssp. dawsonii is one of the most appreciated Mexican wild orchids, with atractive characteristics for ornamental potential according to international standards. It has become an important economic species, subjected to excessive collection and risk of extinction. To ensure its conservation, it is necessary to develop efficient propagation protocols which allow its sustainable utilization and reduce collection. Somatic embryogenesis is an efficient technology for in vitro plant multiplication. In this study we evaluated in vitro conditions for developing a somatic embryogenesis protocol for Laelia anceps ssp. dawsonii. Embryogenic calli was induced from mature seeds, in a Murashige and Skoog medium supplemented with multiple combinations of naphthalene acetic acid (NAA), 6-benzylaminopurine (BAP), kinetin (Kin) and indole 3 acetic acid (IAA). The combination NAA+BAP+IAA (2.0 mg L-1 each) was optimal for callus induction, producing 611 embryoids in a 16 h photoperiod (33.8 µmol m-2 s-1) when subcultured every 45 d on the same medium. This conditions allowed for complete plantlet development. In approximately three months, plantlets achieved 4-5 cm in a V&W medium supplemented with BAP (2 mg L-1), AIA (1 mg L-1) and 0.2 % activated charcoal; after 30 d plantlets were acclimatized in a greenhouse with 95 % survival rate.

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LAELIA ANCEPS SSP. DAWSONII IN VITRO CULTURE SOMATIC EMBRYOGENESIS ORCHIDACEAE BIOLOGÍA Y QUÍMICA BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Encapsulación de embriones somáticos de Laelia anceps ssp. dawsonii para la producción de semilla sintética

Somatic embryoids encapsulation of Laelia anceps ssp. dawsonii to produce synthetic seed

HILDA EULALIA LEE ESPINOSA JOAQUIN MURGUIA GONZALEZ ANTONIO LAGUNA CERDA MARTIN ROBERTO GAMEZ PASTRANA MARIA ELENA GALINDO TOVAR LOURDES GEORGINA IGLESIAS ANDREU NANCY SANTANA BUZZY (2009)

Somatic embryoids obtained from germinated seeds in an MS culture media supplemented with naphthalene acetic acid (NAA), 6, bencylaminopurine (BAP) and indole-3-acetic acid (IAA), 2 mg·liter-1each, were encapsulated in sodium alginate in complex with calcium chloride (CaCl 2·2H2O) 75 mM matrix, to produce synthetic seeds, as a rescue and conservation strategy. In order to determinate the effect of physical and chemical factors, such as stored temperature and time, sodium alginate consistency, and mineral nutriments an plant growth regulators concentration on percentage and time for germination, and the viability of the synthetic seeds, different concentrations of: sodium alginate (2.0, 3.0 and 4.0 %), MS salts (37.5, 50 and 100 %) and BAP (0.5, 1.0 and 2.0 mg·liter -1) added to the encapsulation matrix, were tested at different temperatures (4, 20 and 25 °C) and incubation times (15 and 30 days). A hundred percent germination of synthetic seeds was obtained when 3 % sodium alginate in complex with CaCl2·2H2O at 75 mM was used; MS salts at 100 and 50 % and 2.0 mg·liter-1 BAP supplemented to the encapsulation matrix, achieved 64.54 y 62.77 % germination rate, respectively. No meaningful difference was observed between concentrations.

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ARTIFICIAL SEED ORCHIDACEAE SOMATIC EMBRYOGENESIS BIOLOGÍA Y QUÍMICA