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Diseño y caracterización de microcápsulas de seleniometionina

LILIANA VALDIVIEZO MORALES (2012)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2012.

El objetivo del presente estudio fue diseñar y caracterizar microcápsulas de liberación controlada de seleniometionina de administración vía intramamaria, con dos diferentes de tipos de agentes encapsulantes (carboximetilcelulosa de sodio (NaCMC) y alginato de sodio (/(C6H7NaO6)n)). Las microcápsulas fueron elaboradas por el método de secado por atomización; se utilizó un secador mini Spray-dryer. La caracterización morfológica de las microcápsulas fue mediante microscopía electrónica de barrido. La distribución de las partículas por tamaño para ambos sistemas se determinó con un equipo MasterSize X (1.2b MALVERN) y etilenglicol como dispersante. Se evaluó la cantidad de seleniometionina total encapsulada, el porcentaje de rendimiento, el porcentaje de recuperación, el tamaño de la partícula y la cinética de liberación de seleniometionina desde las microcápsulas; se utilizó como testigo la liberación de la seleniometionina sin encapsular a través del vehículo de entrega (carbopol 2 %). Las variables de respuesta (SeMet total encapsulada, porcentaje de recuperación y porcentaje de rendimiento) fueron significativamente diferentes, con intervalos del 95% de confianza. Las cinéticas de liberación de ambos sistemas (SeMet/NaCMC y SeMet/(C6H7NaO6)n) tuvieron un mayor ajuste al modelo matemático de Korsmeyer. La variación de n para ambos sistemas fue entre 0.5718 y 0.6064, lo que sugirió que la naturaleza del proceso de liberación de la seleniometionina fue por un mecanismo de difusión no fickiano o anómalo. Por lo tanto, el método de secado por atomización resulta una alternativa viable para elaborar microcápsulas de SeMet, además de que el agente encapsulante carboximetilcelulosa obtuvo una mayor eficiencia para el encapsulado de la seleniometionina y protegió la SeMet de la degradación térmica. Por otro lado, la carboximetilcelulosa de sodio mostró un mayor control de la entrega del activo, así como un mayor ajuste de datos a los modelos de Higuchi (1963) y Korsmeyer et al. (1983). _______________ DESIGN AND CHARACTERIZATION OF MICROCAPSULES OF SELENOMETHIONINE. ABSTRACT: The aim of this study was to design and characterize controlled release microcapsules of selenomethionine (SeMet) of intramammary administration, with two different types of encapsulating agents (sodium carboxymethylcellulose (NaCMC), and sodium alginate). The microcapsules were prepared by applying the spray drying method, using a Mini Spray-dryer. Morphological characterization of the microcapsules was made by scanning electron microscopy. The distribution of particles by size was determined for both systems with a computer MasterSize X (1.2b MALVERN) and ethylene glycol as a dispersant. We evaluated the amount of the total encapsulated selenomethionine, the yield percentage, the recovery percentage, the particle size and the release kinetics of selenomethionine from the microcapsules. We used as control the release of unencapsulated selenomethionine through the delivery vehicle (carbopol 2%). The overall response variables of encapsulated SeMet, percentage of recovery and percentage of yield were significantly different with an interval of 95% confidence. The release kinetics of both systems (SeMet/NaCMC and SeMet/(C6H7NaO6)n) had a better fit to the mathematical model by Korsmeyer. The variation of n for both the systems were between 0.5718 and 0.6064, suggesting that the nature of the release process of selenomethionine was through a diffusion mechanism not following the Fick equation neither anomalous. Therefore, the spray drying method is a viable alternative to prepare SeMet microcapsules. In addition, the encapsulating agent of SeMet resulted more efficient and protected SeMet from thermal degradation. Moreover, NaCMC showed better control of delivery of active, as well as a further data adjustment to the models of Higuchi (1963) and Korsmeyer et al. (1983).

Master thesis

Seleniometionina Microcápsulas Cinética de liberación Alginato de sodio Selenomethionine Carboximetilcelulosa de sodio Microcapsules Release kinetics Sodium carboxymethylcellulose Sodium alginate Maestría Ganadería CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Diseño y caracterización de microcápsulas de seleniometionina.

LILIANA VALDIVIEZO MORALES (2012)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2012.

El objetivo del presente estudio fue diseñar y caracterizar microcápsulas de liberación controlada de seleniometionina de administración vía intramamaria, con dos diferentes de tipos de agentes encapsulantes (carboximetilcelulosa de sodio (NaCMC) y alginato de sodio (/(C6H7NaO6)n)). Las microcápsulas fueron elaboradas por el método de secado por atomización; se utilizó un secador mini Spray-dryer. La caracterización morfológica de las microcápsulas fue mediante microscopía electrónica de barrido. La distribución de las partículas por tamaño para ambos sistemas se determinó con un equipo MasterSize X (1.2b MALVERN) y etilenglicol como dispersante. Se evaluó la cantidad de seleniometionina total encapsulada, el porcentaje de rendimiento, el porcentaje de recuperación, el tamaño de la partícula y la cinética de liberación de seleniometionina desde las microcápsulas; se utilizó como testigo la liberación de la seleniometionina sin encapsular a través del vehículo de entrega (carbopol 2 %). Las variables de respuesta (SeMet total encapsulada, porcentaje de recuperación y porcentaje de rendimiento) fueron significativamente diferentes, con intervalos del 95% de confianza. Las cinéticas de liberación de ambos sistemas (SeMet/NaCMC y SeMet/(C6H7NaO6)n) tuvieron un mayor ajuste al modelo matemático de Korsmeyer. La variación de n para ambos sistemas fue entre 0.5718 y 0.6064, lo que sugirió que la naturaleza del proceso de liberación de la seleniometionina fue por un mecanismo de difusión no fickiano o anómalo. Por lo tanto, el método de secado por atomización resulta una alternativa viable para elaborar microcápsulas de SeMet, además de que el agente encapsulante carboximetilcelulosa obtuvo una mayor eficiencia para el encapsulado de la seleniometionina y protegió la SeMet de la degradación térmica. Por otro lado, la carboximetilcelulosa de sodio mostró un mayor control de la entrega del activo, así como un mayor ajuste de datos a los modelos de Higuchi (1963) y Korsmeyer et al. (1983). _______________ DESIGN AND CHARACTERIZATION OF MICROCAPSULES OF SELENOMETHIONINE. ABSTRACT: The aim of this study was to design and characterize controlled release microcapsules of selenomethionine (SeMet) of intramammary administration, with two different types of encapsulating agents (sodium carboxymethylcellulose (NaCMC), and sodium alginate). The microcapsules were prepared by applying the spray drying method, using a Mini Spray-dryer. Morphological characterization of the microcapsules was made by scanning electron microscopy. The distribution of particles by size was determined for both systems with a computer MasterSize X (1.2b MALVERN) and ethylene glycol as a dispersant. We evaluated the amount of the total encapsulated selenomethionine, the yield percentage, the recovery percentage, the particle size and the release kinetics of selenomethionine from the microcapsules. We used as control the release of unencapsulated selenomethionine through the delivery vehicle (carbopol 2%). The overall response variables of encapsulated SeMet, percentage of recovery and percentage of yield were significantly different with an interval of 95% confidence. The release kinetics of both systems (SeMet/NaCMC and SeMet/(C6H7NaO6)n) had a better fit to the mathematical model by Korsmeyer. The variation of n for both the systems were between 0.5718 and 0.6064, suggesting that the nature of the release process of selenomethionine was through a diffusion mechanism not following the Fick equation neither anomalous. Therefore, the spray drying method is a viable alternative to prepare SeMet microcapsules. In addition, the encapsulating agent of SeMet resulted more efficient and protected SeMet from thermal degradation. Moreover, NaCMC showed better control of delivery of active, as well as a further data adjustment to the models of Higuchi (1963) and Korsmeyer et al. (1983).

Master thesis

Seleniometionina Microcápsulas Cinética de liberación Carboximetilcelulosa de sodio Alginato de sodio Selenomethionine Microcapsules Release kinetics Sodium carboxymethylcellulose Sodium alginate Ganadería Maestría CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS PRODUCCIÓN ANIMAL NUTRICIÓN

Diseño y evaluación de microcápsulas de urea In Vitro para su uso en rumiantes

RAYMUNDO LIRA CASAS (2011)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2011.

Las nuevas líneas de investigación en nutrición de rumiantes están buscando diseñar productos con liberación prolongada de urea dentro del rumen. El objetivo de esta investigación fue desarrollar y evaluar microcápsulas que liberen urea en el líquido ruminal. Métodos: Las microcápsulas fueron preparadas por el método de emulsión y evaporación de solvente, como primer paso se preparo el acarreador poroso, después se preparo la fase orgánica con Eudragit RS 100 y por último se preparo la fase acuosa en donde fue agregada la fase orgánica. Las microcápsulas se identificaron mediante microscopia electrónica de barrido, determinando el tamaño y la morfología. Se evaluó la encapsulación de la urea, la flotabilidad de las microcápsulas y la liberación de N amoniacal en líquido ruminal. Resultados: Se encontraron diferencias significativas en el factor volumen de la fase acuosa en el nivel 50 mL (p< 0.05) y presento un efecto negativo en la encapsulación de la urea. La morfología de las microcápsulas fue mejor con el factor bajo de temperatura de la fase acuosa of 35 °C (p< 0.05), comparada con el nivel alto de 45°C. La flotabilidad de las microcápsulas fue arriba del 50% a las 12 h de agitación, mostrando diferencias significativas en el factor volumen de la fase orgánica de 20 mL (p< 0.05). Con las microcápsulas, la liberación de del N amoniacal incremento aun después de las 24 h en el líquido ruminal. El tratamiento con urea sin proteger después de una hora, la concentración de N amoniacal en líquido ruminal incremento rápidamente y entre las 12 y las 24 h declino la concentración. Conclusión: En la elaboración de las microcápsulas el volumen de la fase acuosa regula el porcentaje de encapsulación de la urea, debido a que es muy soluble en agua. El Eudragit RS 100 funcionó bien, encapsulando y manteniendo la lenta liberación de urea que se requiere en una digestión in vitro que simula las condiciones del rumen. _______________ DISIGNING AND EVALUATION OF UREA MICROCAPSULES In Vitro TO USE IN RUMINANTS. ABSTRACT: The new research lines in ruminant nutrition are working to design urea products of prolonged release within the rumen. The objective of this research was to develop and evaluate microcapsules that release urea in the rumen fluid. Methods: The microcapsules were prepared by the method of emulsion and solvent evaporation. First, the porous carrier was prepared; then the organic phase was prepared with Eudragit RS 100; and finally, the aqueous phase, in which the organic phase was added, was prepared. The microcapsules were identified through scanning electron microscopy, determining their size and morphology. Urea encapsulation, buoyancy of the microcapsules, and release of ammonia N in the rumen fluid were evaluated. Results: there were significant differences in the volume factor of the aqueous phase at 50 mL (p <0.05), and there was a negative effect on the encapsulation of the urea. The morphology of the microcapsules was better (p <0.05) with the low temperature factor of the aqueous phase at 35°C than with the high one, 45°C. The buoyancy of the microcapsules was above 50% at 12h of agitation, showing significant differences in the volume factor of the organic phase of 20 mL (p <0.05). With regard to the microcapsules, the release of ammonia N increased even after 24 h in the rumen fluid. In the treatment with unprotected urea after an hour, the concentration of ammonia N in rumen fluid increased rapidly, but between 12 and 24h the concentration declined. Conclusion: In the preparation of the microcapsules the volume of the aqueous phase regulates the percentage of urea encapsulation, because it is very soluble in water. Eudragit RS 100 worked well, encapsulating and maintaining the slow release of urea that is required for in vitro digestion simulating conditions in the rumen.

Master thesis

Urea Microcápsulas Lenta liberación Rumiante Microcapsules Slow release Ruminant Maestría Ganadería CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Encapsulación de extractos de flourensia spp. y evaluación de los encapsulados en un modelo gastrointestinal in vitro

GLORIA NALLELY PUENTE ROMERO (2019)

"Recientemente, algunas especies del género Flourensia han sido identificadas por sus posibles efectos en la salud (por ejemplo, antiinflamatorios y apoptóticos). La encapsulación de extractos de plantas es un proceso que puede permitir una administración de dosis adecuada, así como para proteger los compuestos bioactivos y mejorar su liberación controlada en el sistema gastrointestinal (GI). Por lo tanto, los objetivos de este trabajo fueron: encapsular los extractos de etanol de F. cernua, F. microphylla y F. retinophylla; y evaluar la liberación controlada de extractos encapsulados en un sistema GI in vitro. Hojas de Flourensia spp. se recolectaron en sitios silvestres del estado de Coahuila y los extractos de etanol se obtuvieron mediante el método Soxhlet. La encapsulación se realizó mediante la técnica de gelificación, utilizando alginato y emulsificación. Las cápsulas formadas se caracterizaron en términos de contenido total de fenol (método de Folin-Ciocalteu), actividad antioxidante (ensayos DPPH, ABTS y FRAP), análisis SEM y térmico, y digestión GI in vitro. Se encontró que las microcápsulas tenían una forma esférica y una dimensión de microescala en el rango de 2.1-68.8 μm. Además, la construcción de las cápsulas se confirmó por la aparición de un pico exotérmico centrado a ~600 ° C en el análisis de DSC. F. microphylla destaca por su fuerte actividad antioxidante, incluso en su forma encapsulada. En el sistema gástrico, los extractos de microcápsulas frescas se liberaron de 7.7 a 14.5%, mientras que se observaron valores de 26.5 a 53.3% para los secos. Para el sistema intestinal, se observó una mayor liberación de microcápsulas secas (59.9 a 78.4%) que para aquellas frescas (26.3 a 30.2%). Por lo tanto, se demostró que la microcápsula de alginato protegía los extractos hasta que se entregaron al sitio objetivo en el modelo GI, y este efecto fue mejor con las microcápsulas secas de Flourensia spp. este estudio establecería la guía para la aplicación de Flourensia spp. extractos para aprovechar sus beneficios para la salud humana."

"Recently, some species of the genus Flourensia have been identified by their potential health effects (e.g. anti-inflammatory and apoptotic). Encapsulation of plant extracts is a process that can allow an adequate dosage administration, as well as to protect bioactive compounds and improve their controlled release in the gastrointestinal (GI) system. Therefore, the aims of this work were: to encapsulate the ethanol extracts of F. cernua, F. microphylla and F. retinophylla; and to evaluate the controlled release of the encapsuled extracts in an in vitro GI system. Leaves of Flourensia spp. were collected in wild sites of Coahuila State, and the ethanol extracts were obtained by the Soxhlet method. The encapsulation was performed by the gelation technique, using alginate. The microcapsules formed were characterized in terms of total phenol content (Folin-Ciocalteu method), antioxidant activity (DPPH, ABTS and FRAP assays), SEM and thermal analysis, and in vitro GI digestion. The capsules were found to have spherical-shape and a micro-scale dimension in the range of 2.1-68.8 μm. Also, the built of microcapsules was confirmed by the appearance of an exothermic peak centered at ~600°C in the DSC analysis. F. microphylla noted for its strong antioxidant activity, even in its encapsulated form. In the gastric system the extracts of fresh microcapsules were released from 7.7 to 14.5%, while values of 26.5 to 53.3% were observed for those dried. For the intestinal system, the higher release was observed for dried microcapsules (59.9 to 78.4%) than for those fresh (26.3 to 30.2%). Thus, it was demonstrated that the alginate microcapsule protected the extracts until they were delivered to the target site in the GI model, and this effect was better with the dried microcapsules of Flourensia spp. This study would set the guide for the application of Flourensia spp. extracts in order to take advantage of their benefits to human health."

Master thesis

Microcápsulas digestión gastrointestinal liberación controlada CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Elaboración de microdietas suplementadas con levadura Debaryomyces hansenii para la alimentación de larvas de peces marinos

VIOLETA GLEAVES LOPEZ (2009)

La sustitución de alimento vivo por alimento inerte trae como consecuencia la necesidad de realizar esfuerzos en la investigación para la búsqueda de una partícula capaz de reemplazar eficazmente el alimento vivo. Dentro de este contexto, nuestro principal objetivo es la obtención de dos tipos de microdietas funcionales; microcápsulas y microagregados de 50 a 100 μm de diámetro a los cuales se les incorporó la levadura viva Debaryomyces hansenii como probiótico. Las microcápsulas fueron elaboradas mediante gelificación interna con alginato de calcio al 2% y una inclusión de levaduras equivalente a 106 UFC/g. Por otro lado, se elaboraron dietas microagregadas partiendo de dos alimentos microparticulados (experimental y BERNAQUA®), a los cuales se les incluyó la levadura mediante aspersión utilizando aceite de hígado de bacalao y alginato al 2% como ligantes. Una vez elaboradas las microdietas, se analizó la capacidad de hidrólisis de dichas formulaciones mediante digestibilidad in vitro de proteínas, lípidos y polisacáridos. Dichos análisis fueron realizados utilizando extractos crudos del sistema digestivo de ejemplares juveniles de 2 especies de peces marinos con gran potencial para acuicultura: cabrilla arenera (Paralabrax maculatofasciatus) y pargo amarillo (Lutjanus argentiventris). Nuestros resultados mostraron que el grado de hidrólisis del ligante se encuentra relacionado con los hábitos alimenticios de la especie, ya que para el pargo amarillo se encontró un mayor grado de hidrólisis en los microagregados elaborados con aceite de hígado de bacalao en la digestibilidad in vitro de polisacáridos y en la digestibilidad in vitro de proteínas los microagregados con inclusión de levadura con aceite y alginato no mostraron diferencia significativa (P > 0.005). Mientras que para la cabrilla arenera el mayor grado de hidrólisis se encontró en los microagregados elaborados con alginato al 2 % en la digestibilidad in vitro de polisacáridos, mientras que en la digestibilidad in vitro de proteínas no se observaron diferencias significativas entre los microagregados. Por otra parte, la mejor técnica para la encapsulación de las levaduras vivas es la gelificación interna con alginato de calcio, utilizando hidrolizado de calamar como atractante, ya que este ingrediente confiere una mayor digestibilidad in vitro de proteínas en ambas especies.

Substitution of live prey by inert food has resulted in the need for a major research effort for finding a particle capable for an effectively replacing live feed. Within this context, our main objective is to obtain two types of functional microdiets; microcapsules and microbound under 50 to 100μm in diameter, which were supplemented with live yeast Debaryomyces hansenii as probiotic. Microcapsules were prepared by internal gelling calcium alginate 2% and an inclusion of yeast equivalent to 106 CFU/g. Furthermore, microbound diets were prepared using two types of microparticulate diets (experimental elaborated diet and a commercial diet BERNAQUA®), which were included with yeast by spraying using cod liver oil and 2% alginate as a binder. Once developed the microdiets, their proteins, lipids and carbohydrates in vitro hydrolysis were analyzed. Such analysis was performed using crude extracts of the digestive system of juvenile spotted sand bass (Paralabrax maculatofasciatus) and yellow snapper (Lutjanus argentiventris) which represent two species with great potential for marine aquaculture in northwest of Mexico. Our results showed that the degree of hydrolysis of the binder is related to the feeding habits of the species, for the yellow snapper we found a higher degree of polysaccharide hydrolysis in microbound made with cod liver oil, protein digestibility of microbound including oil and yeast with alginate showed no significant difference (P > 0.005). The spotted sand bass showed the higher polysaccharides in vitro hydrolysis in microboud made with 2% alginate, whereas the protein in vitro digestibility showed no significant differences between microbounds. Moreover, the best technique for the encapsulation of live yeast is the internal gelling calcium alginate, using squid hydrolyzate as atractante, since this ingredient gives a higher in vitro digestibility of protein in both species.

Master thesis

Paralabrax maculatofasciatus; Lutjanus argentiventris; probióticos; levaduras; Debaryomyces hansenii; microcápsulas; microagregados; digestibilidad in vitro; hidrólisis CIENCIAS FÍSICO MATEMÁTICAS Y CIENCIAS DE LA TIERRA CIENCIAS DE LA TIERRA Y DEL ESPACIO OCEANOGRAFÍA OCEANOGRAFÍA ACUICULTURA MARINA

Efecto de la espermina en la expresión del gen de la amilasa e inmunoglobina M durante el desarrollo larvario de la cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatus

Alicia Mónica Olalde Rodríguez (2005)

"El sistema de cultivo larvario de peces marinos ha sido hasta la fecha un cuello de botella en la acuacultura. Las bajas tasas de supervivencia en dichos sistemas se asocian a la incapacidad de las larvas para adaptarse a la secuencia de alimentación durante las primeras semanas de la crianza (Kolkovsky et el al., 1997). El cambio de alimentación endógena a exógena es concomitante a las transformaciones morfológicas y funcionales del tracto digestivo en larvas. Estudios previos indican que algunos componentes de las dietas inertes, así como alimento vivo, regulan la expresión de algunos genes de enzimas digestivas. Un bajo nivel de enzimas citosólicas, asociado a un aumento en las enzimas de la membrana del borde de cepillo, determinan enterocitos maduros en mamíferos y en peces. Aunado a la información sobre los patrones de expresión y actividad enzimática digestiva como indicadores de maduración digestiva (Tovar- Ramírez et al., 2002) éste es el primer informe que considera la Inmunoglobulina M como parámetro de maduración en larvas de peces marinos. Se obtuvieron huevos de un desove natural de reproductores de cabrilla arenera mantenidos bajo condiciones controladas en el laboratorio de Biología Experimental en CICIMAR-IPN (Rosales-Velásquez, 1997). Las larvas fueron sembradas en un sistema de recirculación cerrada y alimentadas con la microalga Nannochloropsis oculata (300,000 cells.ml-1) hasta 12dde. Las larvas fueron alimentadas con el rotífero Brachionus plicatillis (1-10 rotíferos. ml-1) de 2-15dde, con nauplios de Artemia sp. después de 15dde, y juveniles de artemia (2-6 nauplios ml-1) como tratamiento control. Tres tipos de microcápsulas fueron elaboradas como tratamientos experimentales para el 15dde, conteniendo 0%, 0.1%, y 0.3% de espermina. Las larvas fueron coalimentadas con alimento vivo y las microcápsulas por 5 días. Se obtuvo la cuantificación relativa de la expresión del gene de la amilasa y de la inmunoglobulina M en larvas de cabrilla arenera mediante extracción y la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-QPCR) usando Gene Expression assays de Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consistiendo en una mezcla de unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). Las sondas TaqMan® MGB (FAM™ dye-labeled) fueron diseñadas en base a las secuencias parciales de la amilasa y de la inmunoglobulina M de P. maculatofasciatus..."

"Large-scale egg production of marine fish has been a bottleneck in aquaculture systems. Low survival rates in rearing systems are associated with the incapacity of the larvae to adapt to the feeding sequence during the first weeks of culture (Kolkovsky et al., 1997). The change from endogenous to exogenous digestion is concomitant with the morphological and functional transformations of the digestive tract in larvae. Previous reports indicate that some components of the artificial diets, as well as live prey, regulate some digestive enzyme genes. Low levels of some cytosolic enzymes, associated with an increase in enzymes of the brush border membranes, dictates enterocyte maturation in mammals and fish. Contrary to the increasing information on digestive enzymes as maturation digestive indicators, this is the first report which considers the immunoglobulin M as a maturation parameter in marine fish larvae Eggs were obtained from natural spawns of spotted sand bass broodstock maintained under controlled conditions in the Laboratory of Experimental Biology at CICIMAR-IPN (Rosales-Velázquez, 1997). The larvae were reared in a closed recirculating system. Microalgae Nannochloropsis oculata (300 000 cells.ml-1) was added until 12 dah. Larvae were fed rotifers Brachionus plicatillis (1-10 rotifers. ml-1) from 2-15dah, with Artemia sp. nauplii after 15dah, and juveniles (2-6 nauplii ml-1) as a control treatment. Three types of microcapsules were supplied as experimental treatments on 15dah, with 0%, 0.1%, and 0.3% espermine. Larvae were fed live prey and microcapsules for 5 days. We obtained relative quantification of amylase and immunoglobulin M gene expression in larvae of spotted sand bass by RNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (RT-QPCR) using Gene Expression assays from the Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consisting of a mix of unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). The TaqMan® probes were designed based on the amylase and immunoglobulin M partial sequences of P. maculatofasciatus. The eukaryotic 18S rRNA (Applied Biosystems) was used as the endogenous control for normalizing mRNA levels of the target gene. For the enzyme amylase, the forward primer was 5´GTCTGGTCGGTCTGTTGGA-3´ and the reverse primer was 5´CTTGTTCATGAAGTCAGCAACCTT-3´. For immunoglobulin M, the forward primer was 5´TTCAAAACTGCAGACTGGAACAGT-3´and the reverse primer was 5´CACAGTTCCTTGATGGACTCATGAT-3´..."

Master thesis

Larvas de Paralabrax maculatofasciatus, Microcapsulas, Poliaminas, PCR en tiempo real, Cuantificación genica relativa, amilasa, igm CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS PECES Y FAUNA SILVESTRE PISCICULTURA PISCICULTURA